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一、服務概述
        慢病毒（Lentivirus）是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎發展起來的基因治療載體，可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達到良好的基因治療效果。區別于一般的逆轉錄病毒，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力，因此它可以有效地感染包括神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等在內的幾乎所有的哺乳動物細胞，并且感染效率非常高，是傳統質粒轉染方法的數倍甚至數十倍，能夠比較方便快捷地實現目的基因或目的shRNA的長期、穩定表達，是目前較受歡迎的基因治療和基因修飾細胞治療研究工具，在體外實驗及體內實驗的研究中，慢病毒正在獲得越來越廣泛的應用。
        默賽爾生物采用第3代重組慢病毒包裝系統制備病毒顆粒，該套包裝系統具有較高的感染性和安全性能，病毒制備所必需的元件序列被拆分到4個質粒當中，分別是：1）1個編碼目的基因的慢病毒表達質粒；2）2個包裝質粒（pLP1、pLP2）。其中一個質粒編碼Gag和Pol, 另外一個質粒編碼Rev；3）1個編碼包膜蛋白的質粒（pLP/VSVG）。將上述質粒共同轉染到293T細胞中，即可生產出攜帶目的基因的重組慢病毒顆粒，也稱為自我失活VSV-G假型慢病毒，在保證對目的細胞的高感染能力的同時，也具有更好的安全性。

圖1 第三代慢病毒包裝輔助質粒示意圖

圖2 第三代慢病毒結構示意圖


二、服務內容
1. 構建慢病毒載體，使用第三代慢病毒包裝轉染293T細胞。
2. 基因過表達慢病毒的制備；
3. 基因沉默shRNA慢病毒的制備。
4. 病毒純化，并進行滴度確認。

三、服務優勢
1. 采用第三代四質粒包裝系統，具有更高的安全性；
2. 獲得的慢病毒滴度高，經過濃縮后可提獲得滴度≥108TU/mL的慢病毒溶液；
3. 可選擇是否帶有熒光報告基因（GFP、Cherry等）和藥篩標記基因（Puro、Neo等）；
4. 慢病毒的生產在cGMP實驗室中進行，遵循嚴格的質量控制標準，確保生產的慢病毒正確可靠。

四、服務示例（以攜帶PSK2基因的重組慢病毒制備為例）
（1）PSK2基因慢病毒表達質粒構建

圖3 pLVX-CMV-GFP-PSK2質粒酶切鑒定圖

（2）GFP-PSK2慢病毒的檢測

圖4 不同稀釋倍數的GFP-PSK2慢病毒感染293T細胞48小時后的顯微拍攝圖

圖5 不同稀釋倍數的GFP-PSK2慢病毒感染293T細胞48小時后細胞中PSK2基因表達的實時定量 PCR 曲線圖

（4）shRNA慢病毒基因沉默效果的檢測

圖6 兩種shRNA慢病毒感染5637細胞48小時后細胞中FRS2基因表達western結果
 

五、服務價格及周期

服務編號服務項目提供規格價格服務周期
RS001-1目的基因過表達慢病毒表達質粒構建≥500ng/μL, 100μL
1-2周
RS001-2目的基因沉默的shRNA慢病毒質粒構建≥500ng/μL, 100μL
1-2周
RS001-3目的基因過表達慢病毒制備≥108TU/mL, 1mL
3-4周
RS001-4目的基因沉默的shRNA慢病毒制備≥108TU/mL, 1mL
3-4周

 

六、技術服務流程
1. 用戶下載并填寫慢病毒包裝技術服務協議書，發送至service@morecell.com.cn。
2. 雙方確認并簽訂技術服務協議書，按照協議內容進行技術服務。

七、客戶須知
1. 如客戶所需包裝的目的基因由客戶提供，客戶提供需過表達或沉默的基因/蛋白相關信息（包括基因名稱、NCBI編號、CDS區序列、目的基因所在載體圖譜、酶切位點、測序結果等等）；
2. 客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。

八、交付結果
1. 含目的基因序列或基因沉默shRNA序列的慢病毒表達質粒（≥500ng/μL，100μL）
2. 含目的基因序列或基因沉默shRNA序列的慢病毒溶液（≥108TU/mL，1mL）；
3. 陰性對照慢病毒溶液（≥108TU/mL，1mL）
4. 完整的實驗報告。